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食品中合成著色劑的測定

參考GB 5009.35-2023標(biāo)準(zhǔn)

合成著色劑
合成著色劑具有著色力強(qiáng),、色澤鮮艷,、不易褪色、成本低等優(yōu)點(diǎn),，主要作用是改善食品的感官性狀,，增加食品的色澤，促進(jìn)食欲,。不法廠家為了使飲品,、糕點(diǎn)、醬鹵制品呈現(xiàn)誘人的色澤,，違規(guī)使用人工合成著色劑,。長期或一次性大量食用色素含量超標(biāo)的食品，可能會(huì)引起過敏,、腹瀉等癥狀,，當(dāng)攝入量過大,，超過肝臟負(fù)荷時(shí)，會(huì)在體內(nèi)蓄積,，對腎臟,、肝臟產(chǎn)生一定的傷害。GB 2760-2014《食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品添加劑使用標(biāo)準(zhǔn)》中收載的合成著色劑有11種,，分別為檸檬黃,、新紅、莧菜紅,、靛藍(lán),、胭脂紅、日落黃,、誘惑紅,、亮藍(lán)、喹啉黃,、赤蘚紅和酸性紅,，并對其允許使用的食品類型和使用限量做出了明確規(guī)定。

方法優(yōu)勢
迪馬科技參考《GB 5009.35-2023 食品安全國家標(biāo)準(zhǔn) 食品中合成著色劑的測定》,，建立了食品中合成著色劑的測定方法,，采用ProElut^® PWA-2固相萃取柱凈化，HPLC-PDA檢測,。該方法具有提取方法簡單,、回收率高、凈化效果優(yōu)異,、方法穩(wěn)定性好等特點(diǎn),。

注意事項(xiàng)：

1、關(guān)于色譜條件,，不同色譜儀器由于死體積不同,，采用Diamonsil^® C18(2)色譜柱時(shí)，可使用標(biāo)準(zhǔn)原方法梯度程序,，也可以適當(dāng)延長流動(dòng)相初始比例時(shí)間（如本文所示）,以增加檸檬黃和新紅分離度,。另外，標(biāo)準(zhǔn)中采用甲醇作為有機(jī)相,，也可使用乙腈,，分離度更好、基線更加平穩(wěn),，具體方法可致電質(zhì)詢

2,、提取液濃縮時(shí)間控制在40-50min之間，不宜過長，以免造成回收率損失,。

3,、洗脫液氮吹到0.5mL，剩余液體不宜過少,，以避免氮吹影響,，同時(shí)剩余液體也可減少濾膜過濾對化合物吸附。

4,、樣品凈化濃縮,，定容后的液體，用0.45μm親水PTFE濾膜過濾（Cat.#:30109）,，過濾時(shí)需要棄去5滴初濾液,，樣品液體初期接觸濾膜，目標(biāo)物在濾膜上少量吸附,，待濾膜吸附目標(biāo)物飽和后，取續(xù)濾液上機(jī)分析,。

1,、適用范圍

本方案適用于果粒橙、葡萄酒,、綠豆糕,、帶餡兒面包、棒棒糖,、話梅,、果凍、火腿,、醬牛肉等食品中檸檬黃,、新紅、莧菜紅,、靛藍(lán),、喹啉黃、胭脂紅,、日落黃,、誘惑紅、酸性紅,、亮藍(lán)和赤蘚紅11種合成著色劑的測定,。

2、標(biāo)準(zhǔn)品配制

(1) 單標(biāo)儲(chǔ)備液1000μg/mL：稱取適量合成著色劑單標(biāo),，用水配制成1000μg/mL的單標(biāo)儲(chǔ)備液,。

(2) 混標(biāo)中間液50μg/mL：分別吸取0.5mL單標(biāo)儲(chǔ)備液1000μg/mL于10mL容量瓶中，用水定容至刻度,，配制成50μg/mL的混標(biāo)中間液,。

(3) 混標(biāo)中間液10μg/mL：分別吸取0.1mL單標(biāo)儲(chǔ)備液1000μg/mL于10mL容量瓶中,，用水定容至刻度，配制成10μg/mL的混標(biāo)中間液,。

3,、提取

3.1 液體類試樣（果粒橙、葡萄酒）

(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中,，加入25mL乙醇氨水溶液,，振蕩1min，5000rpm下離心5min,，收集上清液于50mL容量瓶中,，并用乙醇氨水溶液定容至50mL，即得提取液,；

(2) 準(zhǔn)確吸取10mL提取液,，50℃水浴下氮?dú)獯抵?mL，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解,，待凈化,。

3.2 固體類試樣（綠豆糕、帶餡兒面包,、棒棒糖,、話梅、果凍）

(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中,，加入2mL水,，50℃水浴加熱混勻樣品，加入25mL乙醇氨水溶液,，振蕩1min,，50℃水浴超聲提取20min，8000rpm下離心5min,，收集上清液于50mL容量瓶中,；

(2) 向下層殘留物中加入10mL乙醇氨水溶液，按照步驟(1)重復(fù)提取一次,，合并上清液,，用乙醇氨水溶液定容至50mL；

(3) 準(zhǔn)確吸取10mL提取液,，50℃水浴下氮?dú)獯抵?mL,，分2-3次共加入10mL5%甲醇水溶液溶解，待凈化,。

3.3 含油量較大的試樣（火腿,、醬牛肉）

(1) 取2.0g樣品于50mL具塞離心管中，加入20mL石油醚，振蕩1min,，超聲提取10min,，8000rpm離心5min，棄去上清液,，加入25mL乙醇氨水溶液,，振蕩1min，50℃水浴超聲提取20min,，8000rpm下離心5min,，收集上清液于50mL容量瓶中；

(2) 向下層殘留物中加入10mL乙醇氨水溶液,，按照步驟(1)重復(fù)提取一次,，合并上清液，用乙醇氨水溶液定容至50mL,；

(3) 準(zhǔn)確吸取10mL提取液,，50℃水浴下氮?dú)獯抵?mL，分2-3次共加入10mL 5%甲醇水溶液溶解,，待凈化,。

乙醇氨水溶液：700mL無水乙醇，4mL氨水,，用水定容至1000mL,。

提取液濃縮時(shí)間控制在40-50min之間,，不宜過長,。

4、凈化

ProElut^® PWA-2 150mg/6mL（Cat.#:65815）

(1)活化：依次加入6mL甲醇,、6mL水,，流出液棄去；

(2)上樣：將待凈化液加入柱中,，控制流速2s/滴,，棄去流出液；

(3)淋洗：依次加入6mL 2%甲酸水溶液,、6mL甲醇,，控制流速約2s/滴，棄去淋洗液,，真空抽干2min(或不抽干),；

(4)洗脫：分兩次加入6mL 2%氨水甲醇溶液，每次3mL,，控制流速約3s/滴,，收集洗脫液；

(5)重新溶解：將洗脫液在50℃水浴下氮?dú)獯抵良s0.5mL，用乙酸銨(20mM,pH9.0)定容至2mL,，渦旋混勻,，用0.45μm親水PTFE濾膜過濾，棄去5滴初濾液,，取續(xù)濾液上機(jī)分析,。

5、分析條件

儀器：LC-2040C

色譜柱：Diamonsil^® C18(2) 250×4.6mm,，5μm（Cat.#：99603）

流速：1.0mL/min  

進(jìn)樣量：10μL

柱溫：30℃

檢測器：PDA 400-800nm

流動(dòng)相：A:甲醇 B:0.02mol/L 乙酸銨溶液

梯度設(shè)置

6,、添加回收結(jié)果

食品中人工合成著色劑的HPLC檢測的添加回收結(jié)果。

添加濃度30mg/kg(加標(biāo)量:50μg/mL,1.2mL)

添加濃度1.5mg/kg(加標(biāo)量:10μg/mL,0.3mL)

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